海岛棉纤维均一化酵母双杂交文库的构建与GbTCP5互作蛋白的筛选

• 作者: 倪志勇 曲延英 石颖颖 蔡永生 郑凯 陈全家
• 来源期刊: 核农学报
• 关键词: 海岛棉 TCP cDNA文库 酵母双杂交 转录因子
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 植物诱变育种·农业生物技术
• 页码范围: 1928-1939
• 页数: 12页
• 字数: 8713字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2019.10.1928

摘要

为探究转录因子在海岛棉纤维中的生物学功能,以海岛棉8个时期的纤维为研究对象,利用SMART技术合成ds-cDNA,经DSN进行均一化处理,构建以pGADT7为载体的海岛棉纤维均一化酵母cDNA文库,利用酵母双杂交系统筛选与海岛棉GbTCP5互作的蛋白.根据克隆得到的GbTCP5基因的CDS区设计含有Nco Ⅰ、EcoRI酶切位点的引物,构建诱饵载体pGBKT7-GbTCP5.经自激活和毒性检测后共转化酵母菌株Y2HGold,筛选与GbTCP5互作的蛋白.实时荧光定量PCR显示,GbTCP5基因在纤维发育起始期和伸长期的表达量较高,且在花瓣和花萼中的表达量高于其他组织.文库的质量检测显示,构建的均一化cDNA文库库容为9.15×107 cfu·mL-1,重组率为100％,插入片段大小在500 ～2 000bp之间.诱饵载体pGBKT7-Gb TCP5通过酵母双杂交系统多次筛选、回转验证,最终确定了4个互作的蛋白,分别是GbTCP20、GbTCP42、GbTCP45和GbAHP1蛋白.海岛棉纤维均一化cDNA文库的构建和筛选,为进一步研究海岛棉TCP转录因子及其互作蛋白在纤维发育时期中的作用机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈全家		112	621	11.0	21.0