伯氏疏螺旋体TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法的建立及对新疆地区蜱的检测

• 作者: 刘丽娅 古丽扎提?塔力甫汗 叶锋 易新萍 王娅 谢彩云 谷文喜 钟旗 马晓菁
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 伯氏疏螺旋体 TaqMan-MGB探针 荧光定量PCR 蜱 检测 新疆
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 89-94,99
• 页数: 7页
• 分类号: S852.61
• 字数: 3478字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2019.11.019

摘要

为建立一种TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR方法,来快速、特异地检测伯氏疏螺旋体,根据GenBank发表的伯氏疏螺旋体16SrRNA序列,应用分子生物学软件进行比对,选取保守序列设计特异性引物及TaqMan-MGB探针,并优化荧光定量PCR反应体系及条件,分别对大肠杆菌、沙门氏菌及钩端螺旋体进行扩增;构建伯氏疏螺旋体标准株16SrRNA基因片段阳性质粒,10倍系列稀释后进行real-time PCR扩增,测定该方法的敏感性.结果可见:仅伯氏疏螺旋体出现阳性扩增,而大肠杆菌、沙门氏菌及钩端螺旋体扩增均为阴性;该方法对阳性质粒的检测限约为100 copies/μL.应用该方法对新疆地区的100份蜱DNA样本进行检测,发现7份为伯氏疏螺旋体阳性.结果表明,本研究建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法具有较高的特异性及良好的敏感性,为今后伯氏疏螺旋体的快速诊断及流行病学调查提供了技术支撑.