N-糖基化对一种新型重组耐高温β-甘露聚糖酶(ReTMan26)稳定性的影响

• 作者: 余晓斌 李国莹 杜瑶 缪静 罗长财
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: N-糖基化 重组耐高温β-甘露聚糖酶 纯化 稳定性
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 工业微生物学
• 页码范围: 11-19
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.180192

摘要

[背景]对来源于嗜热枯草芽孢杆菌(TBS2)的一种新型重组耐高温β-甘露聚糖酶(ReTMan26)基因序列进行分析,该基因中含有3个N-糖基化位点(N8、N26与N255),经毕赤酵母表达时可进行N-糖基化修饰.[目的]确定N-糖基化对ReTMan26稳定性的影响.[方法]通过构建ReTMan26蛋白质三维结构模型,初步分析N-糖基化对该酶稳定性的影响.在此基础上,利用天然蛋白去糖基化试剂盒除去ReTMan26的N-多糖链,获得去除N-糖基化的耐高温β-甘露聚糖酶(ReTMan26-DG),并对纯化后的ReTMan26及ReTMan26-DG进行相应的稳定性对比检测.[结果]ReTMan26与ReTMan26-DG的最适反应pH均为6.0,但在pH l.5-9.0范围内,ReTMan26的稳定性比ReTMan26-DG有小幅提高.ReTMan26的最适反应温度为60℃,比ReTMan26-DG高5℃;ReTMan26经100℃处理10 min,剩余酶活为58.6％,而ReTMan26-DG经93℃处理10 min,剩余酶活为58.2％,100℃处理10 min则完全失活.经胃蛋白酶及胰蛋白酶在37℃处理2h后,ReTMan26的剩余酶活分别为70.5％及91.2％,比ReTMan26-DG分别提高了23.7％及 25.6％.[结论]N-糖基化可提高ReTMan26的pH稳定性、耐热稳定性及抗蛋白酶消化性能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余晓斌	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	99	1198	16.0	30.0
2	缪静	鲁东大学生命科学学院	57	250	10.0	14.0
3	李国莹	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	7	32	3.0	5.0
4	杜瑶	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	6	13	2.0	3.0
5	罗长财	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	2	3	1.0	1.0