犬圆环病毒 Rep基因 SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法的建立及应用

• 作者: 何玄 孙文超 曹亮 朱远致 杜倩 梁莹莹 汪伟 胡传活 辛佳亮 郑敏 闫修魁 韩知晓
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 犬圆环病毒 SYBR Green Ⅰ real-time PCR Rep基因
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1520-1526
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0208

摘要

为建立一种检测犬圆环病毒的快速诊断方法,本试验拟采用普通 PCR方法扩增犬圆环病毒 Rep基因,将目的基因克隆到 T-Vector pMD19 (Simple) ,以测序正确的重组质粒作为模板,建立针对犬圆坏病毒Rep基因的 SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法,并对该方法进行敏感性、特异性和重复性试验.结果显示,Ct值与标准品在 6.18×109~6.18×102 copise/μL范围内主良好的线性关系,其相关性为 0.998 ,斜率为-3.671.检测下限为 6.18× 101 copies/μL ,且对猪圆坏病毒 2型、猪圆坏病毒 3型、犬瘟热病毒、犬传染性肝炎病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒 2型、狂犬病病毒等均无特异性扩增,所有稀释度标准品模板均在 86.45℃出现特异性熔解峰.通过对临床样品进行检测本方法对犬圆环病毒核酸的检出率为 9.72% (7/72).结果表明,本试验成功建立了针对犬圆环病毒 Rep基因的 SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法,可实现对犬圆环病毒快速、灵敏及准确的诊断.