人LDHA基因真核表达载体的构建及其功能鉴定

• 作者: 刘娟 叶棋浓 张德宇 徐小洁 朱祥 杨旭辉 陈玉 马路园
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 人LDHA基因 克隆 真核表达 HepG2肝癌细胞株 聚合酶链反应 绿色荧光蛋白质类
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 406-410
• 页数: 5页
• 分类号: R735.7|Q786
• 字数: 3692字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2019.06.002

摘要

目的 构建带有绿色荧光蛋白(GFP)标签的人乳酸脱氢酶A(LDHA)的真核表达载体,并对其生物学功能进行初步研究.方法 利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人LDHA基因,并将其克隆到pEGFP-C1载体上,经双酶切和测序鉴定成功后转染到肝癌HepG2细胞中,通过Western印迹检测其表达情况,免疫荧光检测其亚细胞定位,并利用生长曲线、克隆形成以及划痕实验探究LDHA对肝癌HepG2细胞增殖、迁移能力的影响.结果 从人乳腺文库中扩增获得大小约为1000 bp的DNA片段,并成功克隆至pEGFP-C1载体上,经测序与目的序列完全一致;转染肝癌HepG2细胞后目的基因成功表达;荧光显微镜观察发现,GFP-LDHA融合蛋白主要聚集于细胞质中;细胞生长曲线和克隆形成实验结果显示,转染pEGFP-LDHA的肝癌细胞较空载体细胞增殖能力增强;划痕实验显示,转染pEGFP-LDHA的肝癌细胞较空载体细胞迁移性增强.结论 成功构建了带GFP标签的人LDHA真核表达载体,为进一步研究LDHA在肝癌细胞中的功能奠定了基础.