人MCHR2基因shRNA真核表达载体构建及鉴定

• 作者: 刘革力 宋方洲 易发平 杨俊霞 石华 袁成福 陈济 马永平 魏丽丽
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因,MCHR2 短发夹RNA 真核表达载体 细胞转染
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 355-358
• 页数: 4页
• 分类号: R338.2
• 字数: 4101字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2007.04.023

摘要

目的 构建针对人黑色素浓集激素受体2(MCHR2)的shRNA真核表达载体,并在人胚肾293(HEK293)细胞中观察其对MCHR2基因表达的影响.方法 根据MCHR2基因序列,设计并合成特异性的小干扰片段,并将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定.用脂质体将重组质粒转染到HEK293细胞中,观察其在mRNA和蛋白水平对MCHR2的影响.结果 通过酶切鉴定和序列测定,成功构建四条表达短发夹RNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功转染到HEK293细胞株中.四条shRNA真核表达载体在mRNA水平对MCHR2抑制率分别为54.9%、66.4%、56.9%、45.8%;在蛋白水平对MCHR2抑制率分别为62.0%、81.0%、73.3%、44.2%.结论 针对人MCHR2的shRNA真核表达载体成功构建及鉴定为进一步研究MCHR2功能奠定了良好的基础.