人LDHA原核表达载体的构建、蛋白纯化及活性鉴定

• 作者: 宋烨琼 张鲁囡 马晓燕
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 人LDHA基因 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 344-347
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 2746字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2018.05.006

摘要

目的 构建带GST标签的人乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)基因原核表达载体并纯化GST-LDHA融合蛋白,为进一步研究该基因在肿瘤中的作用作准备.方法 以人乳腺文库为模板,通过PCR扩增LDHA基因片段;利用EcoRⅠ及HindⅢ酶切带GST标签的载体及LDHA基因PCR产物,并连接形成GST-LDHA重组质粒进行测序;GST-LDHA重组质粒转化入Rossate感受态,并加入合适比例的IPTG进行小量诱导,通过Western印迹检测GST-LDHA蛋白表达;诱导成功的GST-LDHA重组质粒转化入Rossate感受态细胞进行大量增菌,IPTG诱导蛋白表达,利用GST琼脂糖凝胶4B亲和珠纯化GST-LDHA蛋白,并用考马斯亮蓝染色检测,获得纯度较好的蛋白.结果 获得大小约1000 bp的LDHA基因;GST-LDHA重组质粒构建成功;诱导GST-LDHA融合蛋白的表达并纯化获得纯度较好的融合蛋白.结论 成功获得带GST标签的人LDHA基因的原核表达产物,为进一步研究LDHA在肿瘤中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马晓燕	长春中医药大学附属医院心内科	14	19	3.0	4.0
2	宋烨琼	杭州市第三人民医院内分泌科	1	1	1.0	1.0
3	张鲁囡		3	2	1.0	1.0