堆型艾美球虫侵入相关蛋白MIC3受体分子VAPB的克隆与表达

• 作者: 严若峰 周舟扬 宋小凯 徐立新 李祥瑞 黄剑梅
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 堆型艾美球虫 微线蛋白3 受体 VAPB
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 73-78
• 页数: 6页
• 分类号: S855.9
• 字数: 4848字
• 语种: 中文

摘要

堆型艾美球虫感染具有寄生部位特异性,其寄生区位于鸡十二指肠,但造成这种特异性的机制尚不清楚.为研究在球虫侵入过程中可能起重要作用的配体-受体分子,对堆型艾美球虫侵入相关蛋白微线蛋白3 (MIC3)的受体分子VAPB进行克隆及表达.从鸡十二指肠中分离获得肠道上皮细胞,提取细胞RNA,利用RT-PCR技术扩增VAPB基因.分析VAPB基因的分子特征,构建重组表达质粒pET-32a-VAPB,利用大肠杆菌对其进行表达、纯化,并制备大鼠抗重组VAPB蛋白多抗.序列分析揭示了VAPB具有一个完整的开放性阅读框,含有732个碱基对,编码244个氨基酸组成的分子量约为26.8 kD的蛋白,其重组蛋白rVAPB分子量约为45 kD.序列分析表明其等电点约为7.30,无信号肽,含跨膜区、多个O-糖基化位点和磷酸化位点;进化树分析表明鸡的VAPB氨基酸序列与一些动物如Numida meleagris和Coturnix japonica等亲缘关系较近.原核表达、纯化重组蛋白VAPB并获得抗rVAPB大鼠血清.Western blot分析表明鸡十二指肠上皮细胞中的天然VAPB蛋白可被抗rVAPB大鼠血清识别.结果 表明:成功制备了重组蛋白VAPB及抗rVAPB大鼠血清,为研究VAPB蛋白在堆型艾美球虫侵入过程的作用提供基础.