CRISPR/Cas9系统介导Slc6a6基因敲除大鼠的繁殖与鉴定

• 作者: 么秀华 仝慧慧 夏一鸣 徐立霞 王辰 范维佳 莫丽冬 黄慧玲 齐浩铭
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 大鼠 基因敲除 CRISPR/Cas9系统 Slc6a6表达
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 44-50
• 页数: 7页
• 分类号: R-33
• 字数: 5227字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2019.05.007

摘要

目的 利用CRISPR/Cas9技术构建牛磺酸转运体基因(solute carrier family 6 member 6,Slc6a6)敲除大鼠,繁殖并鉴定,为研究牛磺酸缺失对神经系统疾病的影响提供稳定的大鼠模型.方法 针对Slc6a6基因第5外显子,设计向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)介导Cas9核酸酶与靶点DNA特异性结合,并切割基因组DNA,被切割后的DNA进行重组修复,从而实现基因的敲除.通过基因型鉴定和测序分析检测新生大鼠基因型.利用Real-time PCR、Western blot技术和免疫组化等方法,分析大鼠脑组织的牛磺酸转运体(taurine transporter,TauT)的mRNA表达和蛋白表达,建立Slc6a6基因敲除大鼠模型.结果 F3代出现21只Slc6a6基因敲除纯合子(TauT-/-),54只杂合子(TauT+/-),27只阴性(TauT+/+),F3代纯合率约为20.59％,基本符合孟德尔遗传定律.Slc6a6基因敲除纯合子大鼠脑组织mRNA水平基本不表达,TauT蛋白表达水平显著低于同窝阴性大鼠.结论 本研究利用 CRISPR/ Cas9 系统定向敲除 Slc6a6 基因,成功构建 Slc6a6 基因敲除大鼠模型.