人RAF1-RAS结合域蛋白的纯化及功能验证

• 作者: 刘娟 孙万军 张丽芳 徐小洁 李晓希 胡海兰 赵思源
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 人RAF1-RBD蛋白 原核表达 纯化 HRAS 蛋白相互作用
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 183-187
• 页数: 5页
• 分类号: R392-33|Q782
• 字数: 4738字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2019.03.006

摘要

目的 纯化人RAF1(RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase)-RAS(rat sarcoma)结合域(RAF1-RAS binding domain,RAF1-RBD)蛋白并验证其功能.方法 采用PCR法以人乳腺文库cDNA为模板扩增获得RAF1-RBD序列,将其插入至大肠杆菌表达载体pGEX-KG(带GST标签),获得pGEX-KG-RAF1-RBD重组质粒;转化该质粒至感受态细菌BL21(DE3),小量诱导并通过Western印迹法检测其表达;然后采用GST微珠纯化该蛋白;利用GST pull-down技术验证其与HRAS(Harvey rat sarcoma viral oncogene homolog)蛋白相互作用.结果 双酶切鉴定及基因测序结果均表明成功构建重组质粒pGEX-KG-RAF1-RBD;Western印迹分析及SDS-PAGE方法检测结果说明重组蛋白相对分子质量(Mr)约42000,与预期大小一致;GST pull-down技术证明RAF1-RBD与HRAS在体外能够结合.结论 纯化的人RAF1-RBD蛋白与HRAS在体外存在相互作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张丽芳		2	0	0.0	0.0
2	徐小洁	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	2	1	1.0	1.0
3	孙万军	火箭军特色医学中心血液科	3	1	1.0	1.0
4	刘娟	火箭军特色医学中心血液科	2	1	1.0	1.0
8	胡海兰	火箭军特色医学中心血液科	1	0	0.0	0.0
9	李晓希	火箭军特色医学中心血液科	1	0	0.0	0.0