KANSL1蛋白的真核表达纯化及功能验证

• 作者: 张亚昆 李婷 李腾 温开清 潘欣 赵洁 韩秋影
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: KANSL1 杆状病毒表达系统 载体构建 真核表达 蛋白纯化 快速蛋白液相色谱
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 846-850
• 页数: 5页
• 分类号: R373.25
• 字数: 4118字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2019.11.008

摘要

目的 利用昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac)表达KANSL1蛋白并进行纯化,同时验证该蛋白在体外对微管蛋白聚合的影响.方法 构建真核表达载体pFast-Bac-HTB-mCherry-KA NSL1,转化大肠杆菌DH 10Bac感受态细胞获得重组穿梭质粒(Bacmid),用脂质体转染介导Bacmid进入草地贪夜蛾细胞(Sf9 cell),以产生可表达目的基因的重组杆状病毒.随后用此重组杆状病毒感染并扩增Sf9细胞使其大量表达His-mCherry-KANSL1融合蛋白.通过镍柱亲和层析对表达的His-mCherry-KANSL1融合蛋白进行初步纯化,再经快速蛋白液相色谱(FPLC)进一步纯化,利用Western印迹、考马斯亮蓝染色鉴定目的蛋白的表达纯化效果,最后通过体外微管聚合实验分析纯化的KANSL1蛋白对微管蛋白聚合的影响.结果 质粒测序显示,pFast-Bac-HTB-mCherry-KANSL1真核表达质粒构建成功;考马斯亮蓝染色、Western印迹表明纯化得到正确的His-mCherry-KANSL1蛋白,体外微管聚合实验显示KANSL1蛋白显著促进微管蛋白的聚合.结论 成功构建pFast-Bac-HTB-mCherry-KANSL1真核表达质粒并在真核表达系统中表达和纯化,重组KANSL1蛋白具有促进微管聚合的作用,为后续KANSL1蛋白功能研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	温开清	军事科学院军事医学研究院生物医学分析中心	1	0	0.0	0.0
2	李婷	军事科学院军事医学研究院生物医学分析中心	2	0	0.0	0.0
3	张亚昆	军事科学院军事医学研究院生物医学分析中心	1	0	0.0	0.0
4	韩秋影	军事科学院军事医学研究院生物医学分析中心	1	0	0.0	0.0
5	赵洁	军事科学院军事医学研究院生物医学分析中心	1	0	0.0	0.0
6	潘欣	军事科学院军事医学研究院生物医学分析中心	1	0	0.0	0.0
7	李腾		1	0	0.0	0.0