微滴式数字聚合酶链式反应定量检测水产品中溶藻弧菌

• 作者: 付溥博 刘莉 张西萌 徐蕾蕊 曾静 李丹 李碧鹰 汪琦 赵晓娟 马丹 魏咏新 魏海燕
• 来源期刊: 中国食品卫生杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 微滴式数字聚合酶链式反应 溶藻弧菌 定量检测
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 实验技术与方法
• 页码范围: 345-350
• 页数: 6页
• 分类号: R155
• 语种: 中文
• DOI: 10.13590/j.cjfh.2019.04.009

摘要

目的 建立水产品中溶藻弧菌微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)快速定量检测方法.方法 采用SN/T 1870-2016《出口食品中食源性致病菌检测方法实时荧光PCR法》中溶藻弧菌的引物探针,建立优化ddPCR反应体系,梯度稀释溶藻弧菌纯培养液,确定ddPCR方法的检出限(LOD)和定量限(LOQ);通过人工添加试验,比较ddPCR与实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法定量的准确性,以验证ddPCR方法用于检测水产品中溶藻弧菌的可行性.结果 所建立的水产品中溶藻弧菌ddPCR检测方法经过溶藻弧菌标准菌株、分离菌株以及其他近源菌株验证,具有良好的特异性;纯培养的LOD和LOQ一致,均为2.2拷贝/反应,相当于110 CFU/ml纯菌液,定值结果与传统平板计数方法相差0.04个对数值.在人工污染模拟试验中ddPCR的定量结果较qPCR更接近理论添加值,检测重复性以及对低浓度样品的检出情况也均优于qPCR.ddPCR对人工污染样品的LOQ可达120拷贝/g.结论 溶藻弧菌ddPCR定量检测方法特异性好、灵敏度高、结果准确,可为快速定量检测溶藻弧菌提供参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘莉		4	0	0.0	0.0
2	汪琦		4	0	0.0	0.0
3	赵晓娟		3	0	0.0	0.0
4	曾静		6	0	0.0	0.0
5	李丹		4	0	0.0	0.0
6	马丹		4	0	0.0	0.0
7	李碧鹰		1	0	0.0	0.0
8	徐蕾蕊		3	0	0.0	0.0
9	魏咏新		4	0	0.0	0.0
10	魏海燕		4	0	0.0	0.0
11	张西萌		4	0	0.0	0.0
12	付溥博		3	0	0.0	0.0