十二指肠贾第虫γ贾第素基因的原核表达及其表达产物的亚细胞定位

• 作者: 张斯雯 朱伟宁 李巍 杨萱桐 石东东 范琳琳
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 十二指肠贾第虫 γ-贾第素基因 原核表达 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1019-1024
• 页数: 6页
• 分类号: S852.722
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0127

摘要

为了对十二指肠贾第虫(简称贾第虫)γ贾第素(γ-giardin)进行原核表达及亚细胞定位,研究其生物学功能,提取贾第虫总RNA,反转录成cDNA,经PCR获得γ-giardin基因片段,克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a-γ-giardin,再转化入大肠杆菌Rosseta(DE3)后,用IPTG诱导表达,表达蛋白经SDS-PAGE验证,并用切胶纯化法纯化.针对重组蛋白制备了多克隆抗体,并用ELISA测定其效价,Western-blot分析其免疫原性,并利用免疫荧光定位技术对γ-giardin进行定位.结果 表明,成功构建了原核表达质粒pET-28a-γ-giardin.表达的重组蛋白的分子质量约为38 ku,且以包涵体形式存在,纯化后的重组蛋白的纯度高达90％以上.ELISA和Western-blot结果显示,γ-giardin抗体具有良好的抗原特异性与优异的抗原结合活性.免疫荧光定位结果表明γ-giardin主要位于贾第虫滋养体的腹吸盘.本研究为今后探讨贾第虫致病机制、临床诊断和治疗奠定了理论基础.