蓖麻延伸因子基因的克隆与表达分析

• 作者: 吕冬雪 朱国立 王云 王建颖 王芳 董乐 董美玲 许珊珊
• 来源期刊: 核农学报
• 关键词: 蓖麻 转录延伸因子-1α 基因克隆 原核表达 组织表达
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 植物诱变育种·农业生物技术
• 页码范围: 464-472
• 页数: 9页
• 字数: 7346字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2019.03.0464

摘要

为探讨蓖麻延伸因子基因(RcEF-1α)作为参考基因进行相关研究的可行性,以蓖麻雌性花为试验材料,扩增RcEF-1α(GenBank登录号:XM_002518027.3)的编码序列(CDS),并将其亚克隆至原核表达载体pET32a(+)构建成重组载体pET32a(+)-RcEF-1α;将pET32a(+)-RcEF-1α转化至大肠杆菌表达菌株BL21 (DE3)中进行优化表达,表达蛋白经纯化后进行Western blot验证.结果 表明,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)可诱导一个分子量约66 kD的特异蛋白;采用纯化的表达蛋白免疫新西兰白兔制备抗RcEF-1α的多克隆抗血清,用多克隆抗血清进行Western blot验证,发现多克隆抗血清具有针对RcEF-1α的特异性,经ELISA检测,其效价为1:51 200;以抗血清为一抗,通过Western blot分析RcEF-1α在时空条件一致且正常生长的根、茎、叶、雌花、雄花和果实中的表达量,结果显示,蓖麻各组织中RcEF-1α蛋白质的含量存在显著差异,其中雌花和雄花中的含量显著高于其他组织.RT-qPCR分析结果表明,蓖麻各组织中RcEF-1αmRNA差异不显著.本研究结果为蓖麻功能基因表达分析参考基因的筛选提供了一定的理论依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王芳	泉州师范学院海洋与食品学院	39	156	7.0	10.0
2	董乐	泉州师范学院海洋与食品学院	41	169	8.0	10.0
3	朱国立		24	227	8.0	14.0
4	王云	内蒙古民族大学农学院	41	302	10.0	15.0
5	董美玲	泉州师范学院海洋与食品学院	1	3	1.0	1.0
6	许珊珊	泉州师范学院海洋与食品学院	1	3	1.0	1.0
7	吕冬雪	泉州师范学院海洋与食品学院	1	3	1.0	1.0
8	王建颖	泉州师范学院海洋与食品学院	1	3	1.0	1.0