基于昆虫细胞表达的鹅细小病毒VP3蛋白的VP3-ELISA诊断方法的建立

• 作者: 刘明 呼喝巴特儿 孙悦 张云 张树梅 林委卫 葛明 陈秀红 陈雪明
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鹅细小病毒 VP3基因 杆状病毒表达 VP3-ELISA
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1112-1118
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0155

摘要

将鹅细小病毒EP22株VP3基因克隆到杆状病毒转移载体pFast-Bac-HTB中,酶切鉴定及测序筛选出阳性重组转座载体pFastBac-VP3,转化至含有杆状病毒穿梭载体Bacmid的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体,获得重组转座子rBacmid-VP3,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得到含鹅细小病毒VP3基因的重组杆状病毒rBV-VP3.经SDS-PAGE、Western-blot以及免疫组化试验证实,VP3基因在Sf9细胞中成功表达.利用表达的VP3蛋白建立VP3-ELISA血清学检测方法并对130份鹅血清样品进行检测,以中和试验作为金标准进行对比试验.结果 显示,VP3-ELISA检测方法的特异性为100％,敏感性为96.2％,并且VP3-ELISA与其他鹅病阳性血清间不出现交叉反应性.上述研究结果表明,本研究建立的VP3-ELISA是一种特异的、灵敏的血清学诊断方法.