表达EDA-EmIMP1的重组枯草芽孢杆菌的制备 及其免疫效果评价

• 作者: 丁可欣 林霞琳 殷光文 陈志 黄志坚 黄潇航
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 枯草芽胞杆菌 胞内表达 EDA佐剂 EmIMP1 巨型艾美耳球虫
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 免疫学
• 页码范围: 408-413
• 页数: 6页
• 分类号: S852.61
• 字数: 3954字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201807037

摘要

枯草芽孢杆菌可以作为外源蛋白的表达系统,其作为重组蛋白的递呈载体具有很大优势,而纤维连接蛋白外域A(EDA)是一种能够提高目标蛋白抗原性的佐剂.为增强巨型艾美耳球虫的免疫相关蛋白1(IMP1)的抗原性,本研究从已构建的重组质粒中扩增EDA-EmIMP1和EmIMP1基因片段,并构建重组表达质粒pHT01-EDA-EmIMP1和pHT01-EmIMP1,将获得的重组质粒转化枯草芽孢杆菌感受态细胞,制备的重组枯草芽孢杆菌鉴定正确后增殖培养.将实验鸡分为5组,分别是:EDA组(免疫pHT01-EDA-EmIMP1重组枯草芽孢杆菌)、EmIMP1组(免疫pHT01-EmIMP1重组枯草芽孢杆菌)、 枯草芽孢杆菌组、 空白组(PBS)和攻虫对照组.每组鸡口服相应菌液(0.3 mL 1010 cfu/mL菌液/只)进行免疫,每隔2周免疫1次,共免疫3次,每次免疫2周后采血.三免2周后攻虫.采用ELISA方法检测各组鸡血清中EmIMP1的抗体滴度以及细胞因子IL-10和IL-4的含量;并对攻虫后各组鸡的增重、 肠道病变计分以及卵囊排出量进行计算.结果显示:制备的重组枯草芽孢杆菌可以表达目的蛋白,蛋白大小为70 ku.ELISA检测结果显示,EDA组的抗体效价最高,约为1:3200;三免EDA组的IL-10和IL-4的含量均显著高于其它组(p<0.05);EDA组的卵囊排出量显著低于其它组,而枯草芽孢杆菌组和EmIMP1组的卵囊排出量也均显著低于攻虫组(p<0.05);EDA组对肠道保护效果显著优于其它经过攻虫处理的组(p<0.05),而枯草芽孢杆菌组和EmIMP1组之间无显著差异;EDA组增重显著高于攻虫组和枯草芽孢杆菌组(p<0.05).本研究证实枯草芽孢杆菌作为EmIMP1的抗原递呈载体可以有效提高免疫原性,其中EDA佐剂组的免疫效果最好.