基于瞬时表达系统的水稻miRNA靶基因快速验证系统的建立

• 作者: 何晨阳 余超 曹雅倩 朱秀梅 杨凤环 田芳 胡积祥 陈华民
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 水稻 miRNA 荧光素酶 靶基因验证 瞬时表达系统
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 57-63
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0175

摘要

旨在建立一种准确且快速的基于瞬时表达系统的水稻miRNA靶基因验证系统,为研究水稻miRNAs的生物学功能奠定基础.已有研究证实osa-miR169o剪切靶基因OsNF-YA4(LOC_Os03g48970.1)的mRNA,以此为参照,在烟草和水稻原生质体瞬时表达系统中将miR169o前体基因分别与LUC表达载体、LUC-48970和LUC-48970m3融合表达载体瞬时共表达,通过CCD活体成像和Luminometor分析了共表达后LUC活性的动态变化.利用茎环qRT-PCR对miR169o的表达水平进行分析,获得靶基因验证的适合体系.在水稻原生质体体系中,LUC活性和miR169o表达水平在原生质体转化后逐渐增高;24 h时LUC活性最高,相应miR169o表达水平上升10倍左右.综合分析,在原生质体转化后24 h-36 h为适宜检测时间段.在烟草瞬时表达体系中,农杆菌注射72 h后LUC活性最强,而miR169o的表达在48 h后即可上调20倍.因此,农杆菌注射后48 h-72 h为适宜检测时间段.本系统为水稻miRNA靶基因的验证提供了一种简便、快速,且更接近于体内真实情况的实验方法.