大鼠Pdcd4基因真核载体的构建与表达

• 作者: 侯伟 刘海燕 吕社民 李静 金巧艳 钟波 魏伟
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 程序性细胞死亡因子4 基因重组 pEGFP-C1载体 支气管哮喘
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 58-62
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4158字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2019.10.014

摘要

目的 构建大鼠程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,Pdcd4)基因真核表达载体,为进一步研究该基因的功能提供条件.方法 提取E3大鼠肺组织总RNA,RT-PCR扩增大鼠Pdcd4基因全长cDNA;经过双酶切、连接等反应,构建pEGFP-C1-Pdcd4重组表达载体.将该载体转染大鼠巨噬细胞系NR8383细胞,通过RT-qPCR与Western blot法检测NR8383细胞Pdcd4基因的表达.结果 RT-PCR扩增的大鼠Pdcd4全长cDNA为1410bp;pEGFP-C1-Pdcd4重组真核表达载体中插入片段与NCBI GenBank文库中大鼠Pdcd4 cDNA的序列完全一致;倒置荧光显微镜下观察转染后NR8383细胞中绿色荧光蛋白的表达确定转染成功;RT-qPCR与Western blot法检测NR8383细胞中Pdcd4基因的表达水平明显上调.结论 成功构建pEG-FP-C1-Pdcd4重组真核表达载体,为进一步研究Pdcd4基因的作用机制奠定基础.