表达MERS-CoVS1蛋白重组狂犬病病毒rSRV9-MERSS1纯化方法的建立

• 作者: 冯娜 刘川玉 夏咸柱 李恩涛 杨松涛 王化磊 胡星星 赵永坤 迟航 金宏丽 高玉伟
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: MERS-S1 纯化 中空纤维超滤柱 Sepharose 4FF 亲和层析
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 1763-1769
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65|S855.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.09.17

摘要

建立一种可线性放大、应用于表达中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV) S1蛋白重组狂犬病病毒rSRV9-MERSS1的规模化纯化方法.将收获的病毒去除细胞碎片、灭活后,分别通过3种方法(醋酸锌沉淀+Sepharose 4FF凝胶过滤层析、500 000中空纤维超滤柱+Sepharose 4FF凝胶过滤层析、500 000中空纤维超滤柱+ CellufineTM Sulfate亲和层析)进行纯化,经比较筛选出一种温和、目的蛋白回收率高、纯度高的纯化方法.结果 显示,500 000中空纤维超滤柱+ Sepharose 4FF凝胶过滤层析回收的抗原含量最高,50 mL重组病毒原液经纯化后可得到1.82 mg蛋白,杂蛋白去除率达到97.02％,病毒纯度较高,电镜下可见到病毒囊膜刺突.结合成本等方面综合考虑,此方法优于其他2种纯化方法.本试验筛选获得了一种适用于rSRV9-MERSS1的纯化方法,为rSRV9-MERSS1规模化纯化工艺的建立与MERS新型疫苗的研制奠定了基础.