微型人胰岛素基因载体的构建及其在花生中的表达

• 作者: 仵陶 刘培 安胜军 朱正歌 李雪 焦展 邵铁梅
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 分子医药农业 转基因花生 微型人胰岛素 载体构建 基因表达
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 42-46
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 5347字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.04.009

摘要

制备和培养含微型人胰岛素基因的转基因花生植株,从而利用转基因花生表达微型人胰岛素.首先按照植物偏爱密码子设计合成了修饰C肽的微型人胰岛素基因(mini insulin,MI),其中胰岛素B链通过丙-丙-赖三肽和A链相连接,在表达载体pBI121上构建了由花椰菜花叶病毒CAMV35S启动子驱动表达微型人胰岛素的重组质粒RIG.质粒RIG经农杆菌介导法转化至花生胚和去胚子叶中,抗生素筛选得到转基因花生苗,之后利用PCR和Western-blot对转基因花生幼叶进行分子生物学鉴定.结果显示,试验优化了农杆菌介导的花生转基因技术,并且得到了转基因花生苗;分子生物学技术鉴定结果显示,微型人胰岛素基因成功转入花生叶片基因组中,且在花生叶片中表达,其中以花生胚为外植体长出的再生苗的阳性检测率为2.27％.目前正在探索微型人胰岛素基因在花生油体中高效表达的方法,为转基因花生规模化生产微型人胰岛素提供理论基础.