产酸克雷伯菌中水解酶的表达及其在果蔬表面多菌灵去除中的应用

• 作者: 崔婷 陈慧勤
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 多菌灵 水解酶 产酸克雷伯菌 农残降解
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 116-120,126
• 页数: 6页
• 分类号: TS201.3
• 字数: 4298字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.01.022

摘要

为研究酶法清除果蔬表面多菌灵残留效果,从多菌灵污染的土壤中筛选多菌灵降解细菌,并从中克隆多菌灵水解酶,表达纯化后制备为酶制剂,催化果蔬表面多菌灵降解.实验结果表明:通过筛选,从土壤中得到了一株可利用多菌灵为唯一碳源的产酸克雷伯菌Klebsiella oxytoca KO-1.以基因组为模板使用简并引物PCR扩增,得到了一段837 bp的水解酶编码基因.将该基因连接至pET-28a并转化至大肠杆菌BL21中,重组菌成功表达出了28 kDa的水解酶KY-1.使用镍柱蛋白纯化法,成功实现了KY-1的纯化并制备了KY-1酶水剂.经液质检测,KY-1将多菌灵催化为2-氨基苯并咪唑,其纯化蛋白酶活达到36.8 U/mg.将KY-1酶水剂喷洒至果蔬表面后,成功提高了黄瓜、草莓、西红柿和土豆表面多菌灵残留的降解率,最高可达37.3％.本研究成功筛选了一株多菌灵降解菌,并制备了可用于果蔬表面多菌灵降解的酶制剂,为酶法清除农药残留奠定了基础.