卵形鲳鲹组织蛋白酶B基因的克隆及表达分析

• 作者: 乔瑞峰 廖永岩 彭金霞 朱鹏 王姝懿 胡舒 陆专灵 韦友传
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 组织蛋白酶B 卵形鲳鲹 表达分析 溶藻弧菌
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 页码范围: 289-295
• 页数: 7页
• 分类号: Q344+.1
• 字数: 5219字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2020.035

摘要

为研究卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)组织蛋白酶B(Cathepsin B,CatB)基因的表达特征和功能,应用RT-PCR和RACE技术获得卵形鲳鲹CatB(TroCatB)基因的全长cDNA.TroCatB cDNA全长为2181 bp.其中5′UTR和3′UTR分别为391和797 bp,ORF为993 bp,推定编码330个氨基酸残基,推定分子质量和理论等电点分别为36.37 kD和5.73.蛋白结构预测TroCatB蛋白具有信号肽(1Met-18Ala)、前体肽(25Leu-64Gly)和一个典型木瓜蛋白酶家族半胱氨酸结构域,含107Cys、277His、297Asn 3个蛋白酶催化活性位点.同源性分析显示TroCatB蛋白与其他脊椎动物的同源性为67.0％—90.9％,成熟肽区与其他脊椎动物的同源性为73.7％—92.4％.NJ系统发育树显示卵形鲳鲹和其他鱼类聚为一支,与髙体鰤距离最近.实时荧光定量PCR检测TroCatB基因mRNA在健康卵形鲳鲹各组织中均有表达,在脾脏中表达最高;在溶藻弧菌感染后,TroCatB基因在脾脏、头肾组织中的mRNA表达水平显著上调(P<0.05),脾脏在感染6h后,其表达量达到峰值,头肾则是在12h达到峰值.以上结果表明,TroCatB蛋白的结构域和催化活性位点在遗传进化过程中保守,TroCatB基因参与了机体对细菌免疫的相关生理活动,在卵形鲳鲹先天性免疫防御中发挥重要作用,为进一步阐明TroCatB在免疫过程中的功能以及其对病原的抗病机理提供参考.