禽DNA病毒三重PCR检测方法的建立

• 作者: 史同瑞 朱庆贺 杨旭东 王爽 王观悦 田秋丰 苗艳 陈曦
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（下半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 4型禽腺病毒 传染性喉气管炎病毒 禽痘病毒 多重PCR DNA病毒 诊断
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 兽医科学
• 页码范围: 80-82,94
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65|S858.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2020.04.0149

摘要

为了建立可以同时检测4型禽腺病毒(FAdV-4)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、禽痘病毒(FPV)的方法,试验参考GenBank上登录的FAdV-4、ILTV、FPV的基因序列保守片段分别设计引物,优化PCR扩增体系和扩增程序,建立针对以上三种病毒的三重PCR检测方法,并考察方法的特异性、敏感性及对临床样品检测的准确性.结果 表明:最终确定三重PCR最佳扩增体系(50μL)为,FADV-4、ILTV、FPV DNA各5μL,10×Buffer 5μL,dNTP Mix10 μL,Mg2+5 μL,Taq3 μL,引物ILTV-R0.4 μL,ILTV-F 0.4μL,FPV-F 0.8μL,FPV-R 0.8μL,FAdV-R 1.8μL,FAdV-F 1.8 μL,ddH2O6μL.三重PCR最佳扩增程序为95 ℃预变性5 min;95 ℃变性30 s,54℃退火30 s,72℃延伸1 min,共30个循环;72 ℃终延伸10 min;4℃结束反应.所建立的检测方法只能扩增FAdV-4、IL-TV、FPV,而不能扩增鸡马立克病毒(MDV)、减蛋综合征病毒(EDSV),特异性强;该方法对FAdV-4、ILTV、FPV的最低核酸检测量分别为3.01 pg、19.50 pg、25.70 pg,敏感性好;采用建立的三重PCR方法对黑龙江地区临床患病鸡样品进行检测,其扩增结果与单一PCR扩增结果一致,符合率100％.说明该方法快捷、敏感、特异性强,能够实现对FAdV-4、ILTV和FPV的快速鉴定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王观悦		49	74	5.0	6.0
2	杨旭东		77	116	5.0	7.0
3	王爽		145	372	10.0	14.0
4	史同瑞		103	438	11.0	16.0
5	陈曦		81	142	6.0	9.0
6	朱庆贺		24	33	3.0	4.0
7	苗艳		8	6	1.0	2.0
8	田秋丰		1	0	0.0	0.0