TIA抗原基因原核表达载体的构建及表达

• 作者: 刘霁月 卢浩 吴世锴 沈思 王昊 田和
• 来源期刊: 暨南大学学报（自然科学与医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 短暂性脑缺血发作 SEREX 抗原基因 基因重组
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 页码范围: 1-9
• 页数: 9页
• 分类号: R392.7
• 字数: 5965字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11778/j.jdxb.2020.01.001

摘要

目的:克隆并构建短暂性脑缺血发作重组cDNA表达克隆血清学鉴定技术(SEREX)抗原基因原核表达载体,重组GST融合蛋白.方法:采用SEREX筛选所获的70个重组cDNA克隆pBluescript质粒,用限制性内切酶(EcoRⅠ/XhoⅠ、BamHⅠ/XhoⅠ或SmaⅠ/XhoⅠ)双酶切,用质量分数为1％琼脂糖凝胶电泳分离回收目的基因片段.应用Ligation和In-Fusion基因重组技术,将目的基因插入原核表达载体质粒pGEX-4T-1,2,3,转化表达菌株E.coli BL-21感受态细胞,并用IPTG诱导GST标签蛋白表达,通过SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,再经酶切及DNA测序鉴定,成功重组pGEX-4T载体的插入片段可以作为候选靶抗原.结果:成功获得21个重组pGEX-4T载体的靶抗原目的基因,均能够在原核表达系统中成功表达GST融合目的蛋白.结论:应用Ligation和In-Fusion基因重组技术能够有效构建原核表达载体,并在大肠杆菌中表达重组融合目的蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈思	暨南大学附属第一医院麻醉科	17	122	5.0	11.0
2	王昊	暨南大学附属第一医院麻醉科	10	79	3.0	8.0
3	田和	暨南大学附属第一医院麻醉科	4	7	1.0	2.0
4	吴世锴	暨南大学附属第一医院麻醉科	1	0	0.0	0.0
5	卢浩	暨南大学附属第一医院麻醉科	2	1	1.0	1.0
6	刘霁月	暨南大学附属第一医院麻醉科	2	1	1.0	1.0