甘蓝型油菜WRKY69基因的cDNA克隆及表达特征分析

• 作者: 姚玲芳 崔醒 李翠 杨博 梁湾湾 江元清 燕敬利 赵培玉 陈芹芹 高世东
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 甘蓝型油菜 BnaWRKY69 亚细胞定位 非生物逆境 核盘菌 转录活性
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 191-200
• 页数: 10页
• 分类号: S184|Q943
• 字数: 6626字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.02.001

摘要

WRKY转录因子是参与调控植物生长发育、抗逆及防御反应的一类重要蛋白质.本研究利用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术,从甘蓝型油菜(Brassica napus)中克隆了WRKY69的cDNA序列(GenBank No.KC246583),其编码蛋白含有279个氨基酸残基,具有1个WRKY结构域以及C2H2型锌指结构,属于亚组Ⅱ成员.酵母转录活性分析显示,BnaWRKY69可能具有转录激活活性,该活性主要由羧基端序列决定.基于GFP的亚细胞定位结果显示,BnaWRKY69明显定位于细胞核,同时在细胞膜上也有信号.序列分析表明,BnaWRKY69可以发生豆蔻酰化和法尼基化两种翻译后修饰,可能与其特殊的质膜定位有关.通过羟胺(NH2OH)处理,在膜上的BnaWRKY69信号明显减弱甚至消失.通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分析BnaWRKY69在多种非生物逆境、激素以及核盘菌处理下的转录水平变化,发现BnaWRKY69特异性地受到茉莉酸(jasmonic acid,JA)与核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)的诱导.进一步检测发现,在本氏烟草(Nicotiana benthamiana)中瞬时过表达BnaWRKY69,会引起防御相关基因—病程发生相关蛋白1基因(pathogenesis-related 1a,PR1a)、PR2与NPR1(non-expressor of PR 1)的显著上调,同时导致防御素1.2基因(plant defensin 1.2,PDF1.2)的下调.本研究初步解析了BnaWRKY69的基本特性,并探究了其在不同激素与非生物逆境处理后的的表达情况以及响应茉莉酸与核盘菌的分子机理,可为培育抗病性强的油菜品种提供参考依据.