传染性胰脏坏死病毒等温扩增快速检测技术的建立与应用

• 作者: 于灵 吴斌 庞艳华 肇慧君 胡强
• 来源期刊: 水产研究
• 学科: 农学
• 关键词: 传染性胰脏坏死病毒 等温扩增 RT-LAMP 检测
• 年，卷（期）: scyjb,（2）
• 页码范围: 100-106
• 页数: 7页
• 分类号: S94

摘要

为补充现有传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus, IPNV)分子生物学检测手段的不足,本研究以Genbank IPNV基因组中编码A片段多聚蛋白的核苷酸序列为靶序列,针对目标序列的6个区域设计了1对RT-LAMP内引物及1对RT-LAMP外引物。通过优化RT-LAMP方法的退火温度、反应时间等反应条件,同时进行了灵敏度试验及特异性试验,建立了IPNV RT-LAMP检测技术。试验结果为:通过优化各反应条件,结果退火温度为62℃、反应时间为45 min时为IPNV RT-LAMP最佳反应条件;特异性试验显示该方法只与目标病原IPNV有扩增反应,与其他水生动物病原无交叉反应,说明该方法具有良好的特异性;灵敏性试验显示该方法能够检测IPNV RNA的低限为0.01 pg RNA,其检测灵敏度是常规PCR方法的100倍,表明本技术具备较高的灵敏度。试验结果表明,本研究建立的IPNV RT-LAMP技术特异性强、敏感性高、操作简便、反应快速,可通过肉眼判定结果,该方法特别适用于传染性胰脏坏死病的现场及野外检测与诊断,为传染性胰脏坏死病的检测及监测提供了重要的技术手段。