人KRAS真核表达载体的构建及生物学功能鉴定

• 作者: 王艺霖 聂秀红
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: Kirsten鼠肉瘤病毒 癌基因 真核表达 同源二聚体
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 60-63
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 2796字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2020.01.011

摘要

目的 构建带FLAG标签的Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因(Kirsten rat sarcoma viral oncogene,KRAS)真核表达载体,获得其表达产物并鉴定同源二聚体.方法 应用PCR技术从人乳腺文库中扩增出KRAS全长编码区基因,将其克隆到pCMV-FLAG2B载体中,BamHⅠ、XhoⅠ双酶切及测序得到阳性克隆;利用重组质粒转染人胚肾293T细胞,以SDS-PAGE和免疫印迹鉴定表达情况;免疫共沉淀检测FLAG2B-KRAS与Myc-KRAS的相互作用.结果 双酶切和基因测序显示,FLAG2B-KRAS真核表达载体构建成功;SDS-PAGE和免疫印迹结果表明,FLAG2B-KRAS转染人胚肾293T细胞后成功表达;免疫共沉淀结果显示,FLAG2B-KRAS与Myc-KRAS在蛋白水平上具有相互作用,能形成同源二聚体,证明其具有生物学活性.结论 成功构建FLAG2B-KRAS真核表达载体,为进一步探讨KRAS在肿瘤分子生物学中的作用及靶向治疗奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	聂秀红	首都医科大学宣武医院呼吸与危重症医学科	129	796	13.0	20.0
2	王艺霖	首都医科大学宣武医院呼吸与危重症医学科	1	0	0.0	0.0