带FLAG标签小鼠HuR真核表达载体的构建及其生物学功能的鉴定

• 作者: 于文燕 刘爱华 姜勇 李涛 梅柱中 欧小利
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人抗原R 基因表达 基因转录后调控
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 352-355
• 分类号: R349.6
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人抗原R (HuR)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达并初步分析其生物学功能.方法 提取NIH3T3细胞总RNA并反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增得到小鼠HuR编码序列,酶切后克隆至pcDNA3.1-FLAG载体;重组载体经PCR、酶切、测序鉴定正确后瞬时转染NIH3T3细胞,采用Western blotting分析HuR在细胞中的表达,并采用Real-time PCR检测HuR过表达对DUSPl mRNA水平的影响.结果 成功构建了重组质粒pcDNA3.l-HuR-FLAG,Western blotting显示该质粒能在NIH3T3细胞中高效表达,Real-time PCR结果表明HuR过表达可提高细胞内DUSP1基因的mRNA水平.结论 成功构建了带FLAG标签的HuR真核表达载体,该载体能在NIH3T3细胞中有效表达,并具有相应的生物学功能,为深入研究肿瘤细胞中HuR对DUSP1基因表达的调控机制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘爱华	南方医科大学南方医院呼吸科	31	165	8.0	11.0