人源IFITM2基因检测方法的建立及EMCV感染对IFITM2基因转录的影响

• 作者: 冯若飞 张海霞 李向茸 毕英杰 许淑娟 谢晶莹 邓盈盈 韩玉梅
• 来源期刊: 西北民族大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人干扰素诱导跨膜蛋白2 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR 脑心肌炎病毒
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 生物学
• 页码范围: 27-34
• 页数: 8页
• 分类号: R-332
• 语种: 中文

摘要

目的:建立一种干扰素诱导跨膜蛋白2(IFITM2)基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,以期为IFITM2基因的动态监测提供有效的检测技术.方法:根据GenBank中公布的IFITM2基因序列设计特异性引物,以质粒pMD18-T-IFITM2为模板进行条件优化,绘制标准曲线,建立IFITM2基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,并对建立的方法进行条件优化与评价,用建立的方法对脑心肌炎病毒感染后细胞中IFITM2基因转录水平进行检测.结果:建立的20μL检测体系中IFITM2基因最佳引物浓度为10μM,最佳退火温度为59℃;标准质粒在2.62×105～2.62×1010 copies/μL浓度范围内与Ct值呈良好线性关系,线性方程y=-3.495 logx+43.12,R2=0.998,且灵敏性、特异性和重复性均较高.应用建立的方法对EMCV感染细胞中IFITM2基因转录水平进行检测,结果显示,在感染早期IFITM2转录水平不变,感染后期转录水平逐渐升高.EMCV感染引起宿主IFITM2基因转录水平的变化,可能与EM-CV逃逸宿主相关免疫应答有关.结论:成功建立了一种快速、准确检测IFITM2基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法.该方法的建立,为进一步研究IFITM2在EMCV感染过程中的作用奠定了基础.