利用慢病毒介导hTERT基因建立永生化髓核细胞系

• 作者: 刘勇 徐从艳 李大鹏 金沧海
• 来源期刊: 青岛大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 末端转移酶端粒 慢病毒属 转染 髓核 胶原Ⅱ型 蛋白聚糖类
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 骨科专题
• 页码范围: 531-535
• 页数: 5页
• 分类号: R394|R681.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.11712/jms.2096-5532.2020.56.122

摘要

目的 以慢病毒介导人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因转染体外培养的人髓核细胞,建立永生化髓核细胞系,为后期转基因与动物实验提供种子细胞.方法 利用机械与酶消化的方法获得正常的人椎间盘髓核细胞,将构建好的重组慢病毒-hTERT(pLVX-hTERT)转染第2代体外单层培养的髓核细胞.用重组慢病毒-增强型绿色荧光蛋白作为标记物,在荧光电镜下观察细胞转染效率,按感染复数(MOI)40、60、80、100设组,选择出病毒转染的最佳MOI;设立pLVX-hTERT转染组、空病毒转染对照组及空白细胞对照组.在倒置显微镜下观察髓核细胞的形态,用反转录聚合酶链反应、细胞免疫荧光技术检测转染后hTERT基因在髓核细胞内的表达情况,用反转录聚合酶链反应检测髓核细胞Ⅱ型胶原及蛋白多糖的表达情况.结果 慢病毒转染细胞后第6天,MOI为100时转染效率最高,可达82.9％.pLVX-hTERT转染组在转染后第7、15、30、60、90天均可检测到hTERT基因的表达,而两对照组则未见表达.pLVX-hTERT转染组保持了髓核细胞的形态,两对照组的细胞则出现返祖现象.pLVX-hTERT转染组细胞的蛋白多糖及Ⅱ型胶原基因表达水平较其他两组均明显增高(F=173.5、111.1,P<0.05),而两对照组之间则无明显差异(P>0.05).结论 pLVX-hTERT成功转染人椎间盘髓核细胞,转染pLVX-hTERT后的髓核细胞持续表达hTERT,获得永生化的能力,且分泌Ⅱ型胶原及蛋白多糖的量增加.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘勇	青岛大学附属医院	105	300	9.0	14.0
2	李大鹏	青岛大学附属医院	5	9	1.0	3.0
3	金沧海	青岛大学附属医院	3	0	0.0	0.0
4	徐从艳	青岛大学附属医院	1	0	0.0	0.0