白粉菌诱导簇毛麦叶片酵母双杂交文库构建 及CMPG1-V候选互作蛋白筛选

• 作者: 吴承云 孙丽 张恒 张旭 牛影 王海燕 王秀娥 肖进 赵佳 郝永利 陈怡名
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小麦白粉病 簇毛麦 酵母双杂交 CMPG1-V基因 互作蛋白
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 植物科学
• 页码范围: 594-604
• 页数: 11页
• 分类号: Q943.2|S512.1
• 字数: 8787字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.202001036

摘要

[目的]本文旨在使用Mate&PlateTM技术构建簇毛麦受白粉菌诱导的酵母双杂交文库,鉴定正向调节小麦白粉病抗性的簇毛麦E3泛素连接酶蛋白CMPG1-V的互作蛋白,为解析其抗病性机制奠定基础.[方法]提取白粉菌诱导前及诱导后1、2、4、6、12、24和48 h的簇毛麦叶片总RNA,利用SMART技术分离纯化mRNA,合成ds cDNA,将ds cDNA和pGADT7-Rec载体共同转入酵母菌株Y187,构建簇毛麦酵母双杂交文库,明确文库插入片段大小和滴度.以CMPG1-V为诱饵筛选文库,并对部分互作蛋白进行了回补验证,利用BiFC方法验证CMPG1-V与筛选到的1个互作蛋白CMIN6(MYB25-V)的体内互作.[结果]成功构建了受白粉菌诱导的簇毛麦叶片酵母双杂交文库,文库滴度为9.5×107 CFU·mL-1,插入片段长度为250～2000 bp,重组率为100％.以CMPG1-V为诱饵筛选文库,获得79个互作蛋白,挑选其中10个互作蛋白进行回补验证.通过BiFC试验验证了CMPG1-V与MYB25-V的体内互作.MYB25-V及其在小麦中的同源基因TaMYB25受白粉菌诱导后均上调表达,推测MYB25-V可能参与调控小麦白粉病抗性.[结论]本研究成功构建了白粉菌诱导的簇毛麦酵母双杂交文库,为鉴定CMPG1-V的互作蛋白并解析其抗病性机制奠定了基础.