弓形虫RH株ROP18基因的原核表达及鉴定

• 作者: 张曼玉 曹敬政 段倩玉 王权 蒋蔚 陈芸
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 弓形虫 ROP18 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 48-54
• 页数: 7页
• 分类号: S852.723
• 语种: 中文

摘要

为了研究刚地弓形虫ROP18的生物学功能,并深入了解其在抵抗宿主天然免疫方面所发挥的作用,本研究进行了弓形虫RH株ROP 18基因的表达与鉴定.采用PCR方法扩增ROP18的截短基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中后,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并优化表达条件,SDS-PAGE分析表达情况,重组蛋白纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体,通过Western blot及IFA鉴定重组蛋白的免疫活性.结果 表明:以弓形虫RH株基因组DNA为模板,成功扩增出长约678 bp的ROP18截短基因,并构建了原核表达质粒pET-30a-ROP 18,测序结果与GenBank参考序列比对,同源性为100％;SDS-PAGE结果显示,重组蛋白ROP18以包涵体形式存在,分子质量约为31 kDa,且在IPTG终浓度为0.2 mmol/L、37℃诱导表达6h时,表达量最高;Western blot结果显示重组蛋白ROP 18可被感染弓形虫的犬阳性血清识别,表明ROP18有良好的反应原性;IFA结果显示,ROP18主要分布于弓形虫速殖子的胞浆内,且棒状体常存在的部位呈现较强荧光.本研究成功获得重组蛋白ROP18及针对ROP18蛋白的多克隆抗体,为ROP18特性与功能的研究奠定基础.