弓形虫表面抗原1、棒状体蛋白18真核表达载体的构建与体外表达

• 作者: 刘原 吴亮 吴婷 吴腊梅 姜旭淦 曹建平 王晓 苏丹华 陈盛霞 陶思佳 魏逸青
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 SAG1 ROP18 真核表达质粒
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 检验医学
• 页码范围: 246-250,255
• 页数: 6页
• 分类号: R382.5
• 字数: 4257字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y140294

摘要

目的：构建刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）表面抗原1（surface antigen 1，SAG1）及棒状体蛋白18（rhoptry protein 18，ROP18）的真核表达重组质粒，并在真核细胞中表达目的蛋白。方法：设计 SAG1、ROP18的特异引物，采用 RCR 技术从弓形虫 RH 株基因组 DNA 中扩增编码 SAG1、ROP18基因片段，经克隆至 pTG19-T 载体后，亚克隆至真核表达载体 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24，构建真核表达重组质粒 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18。将构建好的真核表达重组质粒转染人肾上皮细胞系293-T 细胞，分析转染细胞的表达情况。结果：PCR 扩增弓形虫 SAG1和 ROP18基因片段分别为1011 bp 和1665 bp，与预期大小相符。重组质粒经 PCR、酶切和测序鉴定结果均正确，通过 RT-PCR 和蛋白质印迹技术鉴定出重组质粒 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和 p3× FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18在293-T 细胞中表达。结论：成功构建了真核表达质粒 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18，该重组质粒能够在真核细胞中表达目的蛋白。