CRISPR/Cas9介导的PD-1基因敲除对食蟹猴T细胞增殖、表型及IFN-γ和IL-2分泌的影响

• 作者: 张超 缪怡 董坚 角德灵 高嫦娥
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 程序性死亡受体1 食蟹猴 CRISPR/Cas9基因编辑技术 基因敲除 T细胞 增殖
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 757-763
• 页数: 7页
• 分类号: R730.51|R392.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385x.2020.07.006

摘要

目的:探讨CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除食蟹猴T细胞PD-1基因对T细胞增殖、表型及IFN-γ、IL-2分泌的影响.方法:设计靶向食蟹猴PD-1基因的gRNA,构建并提取质粒,分离食蟹猴外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),加入质粒DNA,用Lonza 4D电转仪进行细胞转染,转染48 h后用流式细胞术和荧光显微镜技术检测转染效率.提取细胞基因组DNA进行PCR扩增及T7E1酶切鉴定.在人源性CD3抗体和IL-2刺激下诱导食蟹猴T细胞增殖并绘制细胞生长曲线,PI染色流式细胞术检测T细胞的细胞周期及CD4、CD8表达水平,ELISA检测IFN-γ、IL-2的分泌水平.结果:转染48 h后,荧光显微镜下见实验组出现绿色荧光蛋白表达的细胞,其转染效率为(21.6±3.2)％;实验组细胞基因组DNA PCR产物经T7E1酶切显示3条带,出现目的分裂条带(243、197 bp).与未转染组比较,(1)实验组T细胞增殖缓慢、集落形成时间延迟、细胞体积较小、折光性较弱;(2)实验组处于G0/G1期的T细胞数显著增多(P<0.05)、G2/M期细胞数显著减少(P<0.05);(3)实验组T细胞IFN-γ、IL-2的分泌水平显著升高(均P<0.05),但CD4、CD8表达水平比较差异无统计学意义(均P>0.05).结论:PD-1基因敲除可使食蟹猴T细胞阻滞于G0/G1期从而抑制其增殖,同时上调了IFN-γ、IL-2的分泌水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董坚	昆明医科大学第三附属医院云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室	32	94	5.0	8.0
2	张超	曲靖市第一人民医院肿瘤科	10	17	2.0	3.0
3	缪怡	曲靖市第一人民医院肿瘤科	1	0	0.0	0.0
4	角德灵	云南农业大学生物资源保护与利用重点实验室	2	0	0.0	0.0
5	高嫦娥	昆明医科大学第三附属医院云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室	4	32	2.0	4.0