大鼠Slfn3基因重组腺病毒载体的构建和包装

• 作者: Nganguem Nzalle Yranney Brice 况春燕 刘兴德 周海燕 张蓓 林慕之 毛善永 王艺明 莫丽莉
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 大鼠 心血管疾病 Slfn3基因 重组腺病毒 构建 包装
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 专题研究2
• 页码范围: 260-264,269
• 页数: 6页
• 分类号: R541.1
• 字数: 2994字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2020.03.003

摘要

目的:构建携带大鼠Slfn3基因的重组腺病毒表达载体,转染HEK293细胞产生病毒.方法:以pMSV-Slfn3-GFP为模板扩增Slfn3基因,再以质粒pAdeno-EF1a-MCS-MCMV-EGFP-3FLAG为载体,通过酶切、连接及转化获得pAdeno-EF1a-Slfn3-MCMV-EGFP-3FLAG重组腺病毒载体,采用内切酶NheI酶切及测序鉴定重组腺病毒载体,将该重组载体在HEK293细胞进行包装和放大培养,镜下观察荧光、Western blot鉴定重组质粒标签Flag蛋白在HEK293细胞中的表达.结果:构建重组腺病毒质粒pAdeno-EF1a-Slfn3-MCMV-EGFP-3FLAG,并在HEK293细胞中成功包装和扩增,经鉴定获得重组腺病毒rAD-Slfn3.结论:成功构建重组腺病毒载体pAdeno-EF1-Slfn3-MCMV-EGFP-3FLAG,并在HEK293细胞成功获得重组腺病毒rAD-Slfn3.