滑液支原体DnaK的原核表达及免疫原性分析和亚细胞定位

• 作者: 刘佳 包世俊 张生英 武小椿 温峰琴 邢小勇
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 滑液支原体 dnaK基因 免疫原性 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1029-1036
• 页数: 8页
• 分类号: S852.62
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0140

摘要

参照GenBank中滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)WVU1853株dnaK基因序列(CP011096.1)设计并合成特异性引物,利用overlap PCR技术扩增获得MS dnaK基因,并将其克隆至pMD19-T载体,在序列分析的基础上将该基因克隆至pET-28a(+)质粒,构建原核表达载体pET-dnaK并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,进行SDS-PAGE分析.继而将纯化表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA、Western-blot和免疫荧光试验对MS DnaK的免疫原性及其在细胞内的分布进行分析.结果 显示,MS dnaK基因全长1 791 bp,编码596个氨基酸,重组蛋白rMSDnaK在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,且其相对分子质量约为67 ku.间接ELISA和Western-blot结果表明,rMSDnaK具有良好的免疫原性,且MS DnaK在其胞浆和胞膜中均有分布,但在胞膜中含量较多,免疫荧光试验进一步证实DnaK在MS膜表面的分布.本研究结果为进一步研究MS DnaK的生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邢小勇		42	49	4.0	4.0
2	温峰琴		36	45	4.0	5.0
3	刘佳		19	104	6.0	10.0
4	包世俊		43	52	4.0	5.0
5	武小椿		11	1	1.0	1.0
6	张生英		4	1	1.0	1.0