肝靶向肽修饰的人内皮抑制素rES-CSP融合蛋白可溶性表达及活性鉴定

• 作者: 余田甜 张晶晶 汪洁 许敏华 金小宝 马艳
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 可溶性表达 肝靶向肽修饰的人内皮抑制rES-CSP 活性鉴定
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 15-18
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2020.05.015

摘要

为了方便获得大量的有活性rES-CSP融合蛋白,通过优化诱导表达条件,实现融合蛋白rES-CSP的可溶性表达,并纯化后检测其生物学活性,使该融合蛋白作为药用蛋白大规模生产成为可能.首先在常规条件下诱导表达融合蛋白rES-CSP,通过SDS-PAGE电泳分析,选出最优菌株;继而优化诱导温度和诱导时间,Western Blot检测目的 蛋白可溶性表达情况,Ni-NTA亲和层析柱进行纯化后RP-HPLC分析其纯度;CCK-8细胞增殖实验和流式细胞仪检测融合蛋白生物学活性.结果 选出目的 蛋白约占菌体总蛋白43.84％的单克隆菌株为研究对象,在诱导温度为25℃,诱导时间为20 h时,融合蛋白rES-CSP实现可溶性表达,并且可溶性表达量较高.经纯化后获得的rES-CSP融合蛋白纯度达到98％以上;制备的rES-CSP融合蛋白具有抑制肝癌细胞HepG2增殖作用,且与HepG2结合能力较强;为融合蛋白rES-CSP的应用研究奠定基础.