ASH1L甲基转移酶在牛卵丘细胞中的表达与功能研究

• 作者: 崔立欣 庞云渭 朱化彬 杜卫华 田雅晴 赵善江 赵学明 邹惠影 郝海生
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: ASH1L甲基转移酶 牛卵丘细胞 H3K36甲基化修饰 凋亡
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 生物技术与繁殖
• 页码范围: 1866-1877
• 页数: 12页
• 分类号: S823.3
• 字数: 7048字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.08.010

摘要

旨在探究缺失、小的、同源异形1(absent,small,or homeotic 1-like,ASH1L)甲基转移酶在牛卵丘细胞中的表达与功能.本研究通过免疫荧光染色在健康母牛卵丘细胞中对ASH1L甲基转移酶进行定位,并分析细胞的组蛋白H3第36位赖氨酸(histone H3 lysine36,H3K36)甲基化修饰模式;合成靶向Ash1L基因的siRNA,对siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3及对照组进行荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹,筛选有效siRNA;采用荧光定量PCR分析干扰A sh1L表达对处理组及对照组中凋亡相关基因及多梳抑制复合体(polycomb repressive complex 2,PRC2)组成基因的表达水平的影响.结果显示,ASH1L甲基转移酶位于牛卵丘细胞的细胞核中,呈点状分布.成功筛选到能有效干扰牛A sh1L基因的siRNA-2,其干扰效率为60％ ～70％.将siRNA-2转染卵丘细胞后,该干扰组细胞中H3K36的单甲基化、二甲基化及三甲基化3种甲基化水平均显著低于对照组(P<0.05);干扰Ash1L导致凋亡相关基因Bax、Bcl-2及caspase-3表达水平显著上调,凋亡基因Bax和caspase-3表达量高于抗凋亡相关基因Bcl-2(1.311和1.179 vs 1.146);同时,干扰Ash1L基因表达也引起PRC2蛋白亚基EZH2和Suz12基因的mRNA表达量显著升高(P<0.05).综上所述,本研究探讨了ASH1L甲基转移酶在牛卵丘细胞中的表达和功能,ASH1L在牛卵丘细胞中呈点状分布,且Ash1L基因的抑制导致H3K36me1/2/3水平均显著下降及凋亡基因和PRC2蛋白相关亚基EZ H2和S uz12基因表达的升高,为进一步研究其对家畜胚胎的调控作用提供技术和理论基础.