GPD1酶在毕赤酵母中的表达及纯化

• 作者: 吴永定 张玉婷 朱莹莹 杨盛帮 江福能 谭惠静 钟惟德
• 来源期刊: 广东药科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: GPD1酶 毕赤酵母 分泌表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 医学研究
• 页码范围: 710-714
• 页数: 5页
• 分类号: Q55
• 语种: 中文
• DOI: 10.16809/j.cnki.2096-3653.2020060801

摘要

目的 构建可以分泌表达GPD1酶的毕赤酵母,并使用Profinia蛋白纯化系统获得纯度90％以上的GPD1酶,扩大GPD1酶的制备,以进一步研究其在肿瘤中的功能及作为抗肿瘤靶点的临床应用研究.方法 提取人细胞的总RNA,逆转录成cDNA,以此为模板通过PCR扩增GPD1基因,PCR产物与表达载体pPICZα-C用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切,连接构建重组表达质粒pPICZα-C-gpd1;pPICZα-C-gpd1质粒电转至毕赤酵母X-33中,筛选阳性转化子,经甲醇诱导表达,采用固化金属亲和层析(IMAC)纯化分泌的目的蛋白.结果 经SDS-PAGE鉴定,成功表达和纯化了GPD1酶,纯度达90％以上.结论 本研究建立了毕赤酵母分泌表达GPD1酶的方法,可用于制备GPD1酶,为进一步的肿瘤机制研究和应用研究奠定基础.