捻转血矛线虫ABC转运蛋白的基因克隆、原核表达及纯化

• 作者: 刘春霞 呼和巴特尔 孙柯 王姝懿 王文龙 赵学亮
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 捻转血矛线虫 ABC(ATP-binding cassette)转运蛋白基因 生物信息学分析 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1830-1836
• 页数: 7页
• 分类号: S855.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.10.011

摘要

捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)是绵羊(Ovis aries)、山羊(Capra hircus)等反刍动物重要的寄生虫之一,可造成养殖业的巨大经济损失.基于转录组研究,本课题组前期从捻转血矛线虫耐药虫株中鉴定获得耐药基因—ABC(ATP-binding cassette)转运蛋白基因(GenBank No.MT478136).本研究拟分析ABC转运蛋白基因的生物信息学特征,建立ABC转运蛋白的可溶性诱导表达及纯化体系,为进一步探究ABC转运蛋白参与的耐药机制提供参考依据.首先利用在线软件对ABC进行蛋白质结构分析及抗原表位预测,结果显示,ABC分子式为C928H1502N270O265S7,属于不含跨膜区和信号肽的亲水性蛋白质,二级结构主要以延伸链为主;ABC转运蛋白的抗原性较高,含有较多的抗原表位.利用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)扩增ABC转运蛋白基因,经酶切连接构建重组质粒pET30a(+)-ABC,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21后进行诱导表达条件的优化,以0.6 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)于37℃诱导7 h可重组表达1 mg/mL ABC转运蛋白.本研究成功诱导表达并纯化了捻转血矛线虫重组ABC转运蛋白,可为深入开展其潜在耐药机制及免疫原性研究工作提供基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王文龙		30	108	6.0	9.0
2	呼和巴特尔		36	97	6.0	7.0
3	刘春霞		27	35	3.0	4.0
4	赵学亮		4	1	1.0	1.0
5	王姝懿		2	4	1.0	2.0
6	孙柯		2	1	1.0	1.0