猪ACRBP基因真核表达载体的构建及生殖系统表达验证

• 作者: 张守全 梁耀娣 潘学情 赵坤 陈云
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 ACRBP 酶切 真核表达载体 转染 Western-blot
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 176-181
• 页数: 6页
• 分类号: S828.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.19556/j.0258-7033.20191019-02

摘要

本实验旨在获得带有增强型绿色荧光蛋白及表达猪ACRBP基因的pIRES2-EGFP-ACRBP真核表达载体和CHO细胞株,并且检测猪睾丸、附睾、前列腺、尿道球腺、精子、精清、性成熟母猪卵巢和输卵管中ACRBP蛋白的表达情况.本实验通过基因克隆的方法获得猪源ACRBP基因,并构建了pIRES2-EGFP-ACRBP真核表达载体,经过双酶切、测序鉴定后,转染CHO细胞,通过绿色荧光观察、RT-PCR和Western-blot检验ACRBP表达载体在CHO癌细胞株中的表达情况.结果 显示:ACRBP蛋白在睾丸、附睾、前列腺、尿道球腺、卵巢、输卵管、精子中有条带,而在猪的精清中没有条带,转入CHO细胞后可观察到带荧光的阳性质粒,通过RT-PCR和Western-blot检测到ACRBP在CHO中得到了表达.