烟曲霉纤维二糖水解酶cbh基因在大肠杆菌中的表达

• 作者: 杨海峰 魏亚琴 杨宇泽 万学瑞 孙康永杰 成述儒 王川
• 来源期刊: 草业科学
• 关键词: 烟曲霉 纤维素 纤维素酶 纤维二糖水解酶 大肠杆菌 酶活 克隆与表达
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 前植物生产层
• 页码范围: 2457-2462
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11829/j.issn.1001-0629.2020-0107

摘要

为构建高效表达的纤维素酶基因工程菌,本研究以烟曲霉(Aspergillus fumigatus)基因组DNA为模板,通过PCR扩增出纤维二糖水解酶cbh(cellobiohydrolase)基因,将其连接到原核生物表达载体pET-28a中,并转化至大肠杆菌(Escherichia coli)菌株BL21(DE3)中诱导表达蛋白CBH(cellobiohydrolase),同时采用刚果红染色、3,5-二硝基水杨酸(3,5-Dinitrosalicylic,DNS)法测定重组菌株酶活力.结果表明:成功构建表达载体pET-28a::cbh,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopro-pyl-β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)终浓度为1 mmol·L-1,诱导温度为28℃,诱导时间为14 h,纯化后的蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)得到一条75kDa的目的蛋白,通过羧甲基纤维素钠(carboxymethylcellulose-Na,CMC-Na)刚果红平板检测到pET-28a::cbh/Ecoli可以产生水解圈,表明获得的重组菌株具有酶活性,其酶活力为0.0563 U·mL-1.本研究构建的重组纤维素酶菌株,可为改善牧草青贮品质和提高反刍动物生产性能奠定研究基础.