CD14蛋白表达、纯化及单克隆抗体制备

• 作者: 刘丽 刘冲 和婷 王会平 董轲 郜赵伟
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: CD14 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2020,（19）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3616-3620
• 页数: 5页
• 分类号: R-33|Q789|R446.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2020.19.003

摘要

目的:制备CD14重组蛋白及抗CD14单克隆抗体.方法:从人外周血淋巴细胞中克隆CD14编码基因,将其连接至质粒pRSETC,构建表达质粒pRSETC/CD14,转染大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),筛选阳性克隆、用IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测CD14蛋白表达水平,应用镍柱进行亲和纯化,SDS-PAGE及Western blot进行纯化产物鉴定.纯化后的CD14蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术筛选分泌单克隆抗体细胞株,制备单克隆抗体,利用Western blot鉴定抗体活性.结果:获得CD14编码基因,并成功进行了原核表达,SDS-PAGE显示CD14以包涵体形式表达,纯化产物的纯度超过95％.利用杂交瘤技术筛选出稳定分泌抗CD14抗体的细胞株,并制备了高纯度的单克隆抗体,抗体具有CD14蛋白结合活性.结论:成功表达纯化了CD14蛋白,并制备了抗CD14单克隆抗体,为后续开发CD14检测技术提供抗体.