鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF4蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其免疫原性分析

• 作者: 孟少东 姜新宇 葛恒 胡光耀 杨大佐 张家林 李强
• 来源期刊: 大连海洋大学学报
• 关键词: 鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2) 杆状病毒表达 ORF4蛋白 免疫原性
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文|Articles
• 页码范围: 393-398
• 页数: 6页
• 分类号: S941.41
• 语种: 中文
• DOI: 10.16535/j.cnki.dlhyxb.2020-166

摘要

为进一步研究鲤疱疹病毒Ⅱ型 ( Cyprinid herpesvirus 2, CyHV-2) ORF4蛋白的功能, 通过PCR扩增CyHV-2 ORF4基因, 并构建重组穿梭质粒pFastBac HTA-ORF4, 将其转化至大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞后获得重组杆粒Bacmid-ORF4; 采用脂质体法转染Sf9细胞后, 利用间接免疫荧光法 ( IFA) 和West-ern blot鉴定重组蛋白, 采用His亲和层析柱纯化重组蛋白, 并通过小鼠免疫试验分析其免疫原性.结果表明: 转染72 h后Sf9细胞逐渐呈现出细胞变圆、细胞核明显增大的形态变化; 间接免疫荧光结果显示, 重组杆状病毒感染的Sf9细胞中出现了明显的绿色荧光; Western blot结果显示, 纯化的CyHV-2 ORF4蛋白能够与抗His单抗发生特异性反应; 小鼠免疫试验显示, 纯化的CyHV-2 ORF4蛋白能诱导小鼠产生特异性免疫反应.研究表明, 本研究中获得的CyHV-2 ORF4蛋白有较好的免疫原性, 为CyHV-2 ORF4蛋白的功能解析提供了良好材料.