抗寨卡病毒非结构蛋白1单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 刘静娴 曾晓燕 宗泱 史凤娟 郭喜玲 焦永军
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 关键词: 寨卡病毒 非结构蛋白1 单克隆抗体 鉴定
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 论著|ORIGINAL ARTICLES
• 页码范围: 27-31
• 页数: 5页
• 分类号: R373.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13350/j.cjpb.210106

摘要

目的 制备抗寨卡病毒非结构蛋白1的小鼠杂交瘤单克隆抗体,并对筛选获得的单抗进行抗体亚型鉴定以及免疫结合特性鉴定. 方法 将真核表达纯化获得的寨卡病毒非结构蛋白1按50 μg/只的量免疫3只SPF级BABL/c小鼠,经过3次皮下多点免疫及1次腹腔加强免疫后测定小鼠血清抗体效价,取抗体滴度高的免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,使用有限稀释法进行亚克隆,采用间接ELISA筛选分泌高滴度单抗的杂交瘤细胞株,使用小鼠单克隆抗体分型试剂盒对筛选的单抗进行亚型鉴定,分别使用免疫印迹与间接免疫荧光法检测单抗与寨卡病毒非结构蛋白1以及寨卡病毒的免疫结合特性. 结果 寨卡病毒非结构蛋白1免疫刺激小鼠产生高滴度的抗体,ELISA滴度为1∶64 000.通过筛选获得2株能高效分泌抗寨卡病毒非结构蛋白1单抗的杂交瘤细胞株(命名为1C9-F12,4B2-F3),分泌的单抗的亚型均为重链γ1和轻链Kappa;Western blot及IFA法检测2株单抗均能与寨卡病毒非结构蛋白1及寨卡病毒发生特异性结合. 结论 成功筛选到2个抗寨卡病毒非结构蛋白1的小鼠单克隆抗体,该两个单抗均具有寨卡病毒非结构蛋白1及寨卡病毒结合特性,为建立检测寨卡病毒感染的ELISA方法及治疗性抗体研究奠定了基础.