胰蛋白酶对Madin-Darby犬肾细胞消化方法的研究

• 作者: 刘琛 李兴航 孟子延 夏志武 年悬悬 龚铮 韩天 闫璐瑶 张家友 刘雄 杨晓明
• 来源期刊: 国际生物制品学杂志
• 关键词: Madin-Darby犬肾细胞 传代培养 细胞消化 胰蛋白酶
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 158-162
• 页数: 5页
• 分类号: R392-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20200828-00084

摘要

目的:考察不同胰蛋白酶及消化后是否弃去胰蛋白酶对Madin-Darby犬肾(Madin-Darby canine kidney，MDCK)细胞消化效果的影响，并评价培养基中添加胎牛血清对减轻胰蛋白酶细胞毒性的作用。方法:选用5种胰蛋白酶分别消化MDCK细胞，消化5 min后弃去胰蛋白酶为弃去组，不弃去为保留组。观察消化过程，记录细胞达到不同状态所需的时间。完全消化后，检测细胞的活率、结团率、直径。以不同浓度的胰蛋白酶消化MDCK细胞，按培养基是否添加胎牛血清分为含血清和无血清组，检测细胞活性。结果:重组胰蛋白酶消化时间长于动物源胰蛋白酶。保留和弃去组细胞活率均值都大于94.77%，结团率均值均大于34.56%，直径均值分别为17.33和16.97 μm且差异有统计学意义( t＝4.632, P<0.001)。细胞活性随胰蛋白酶添加量呈现梯度变化。含血清和无血清组的细胞活性差异有统计学意义( t＝12.545, P<0.001)。 结论:5种胰蛋白酶均可完全解离贴壁MDCK细胞，其中重组胰蛋白酶消化时间较长，作用温和，比较适合生产。弃去胰蛋白酶再继续消化的做法可行且有益，胰蛋白酶浓度对细胞活性有影响，胎牛血清可以减轻胰蛋白酶的潜在毒性。