人SMAD4全长及剪接体在HEK-293T细胞中的亚细胞定位及转录活性分析

• 作者: 方晋仁 尹小慧 周涛 李国庆 秦辉 杨南扬
• 来源期刊: 生命科学研究
• 关键词: SMAD4 选择性剪接 绿色荧光蛋白(GFP) HEK-293T细胞 亚细胞定位 转录活性
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 生物化学与分子生物学|BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
• 页码范围: 95-101
• 页数: 7页
• 分类号: Q51
• 语种: 中文
• DOI: 10.16605/j.cnki.1007-7847.2020.05.0179

摘要

为了观察人SMAD4全长及剪接体在HEK-293T中的亚细胞定位,并分析它们在HEK-293T细胞中的转录活性差异,将SMAD4全长及剪接体的pEGFP-C1重组质粒转染至HEK-293T细胞中,在荧光显微镜下观察含GFP标签的SMAD4全长及其剪接体蛋白的亚细胞定位,并通过双荧光素报告酶实验在HEK-293T细胞中对SMAD4全长及其剪接体激活SBE报告基因的情况进行比较.亚细胞定位观察显示,与pEGFP-C1空载组中GFP在HEK-293T中呈现核质均匀分布不同,GFP-SMAD4和GFP-SMAD4△4、GFP-SMAD4△6、GFP-SMAD4△5-6、GFP-SMAD4△4-6、GFP-SMAD4△4-7五种剪接体均分布于 HEK-293T 的细胞质中;而GFP-SMAD4△3则主要分布于HEK-293T的细胞核中.双荧光素酶实验结果显示,与空载组相比,在6种剪接体过表达组中,只有SMAD4△3过表达组能对SBE报告基因的荧光素酶活性起到一定的上调作用;但与SMAD4△3过表达组比较,SMAD4全长过表达组能对SBE报告基因的荧光素酶活性起到更明显的上调作用.本文观察了人SMAD4全长及剪接体在HEK-293T中的亚细胞定位,并分析了其对下游信号通路的转录激活情况,可为后续SMAD4剪接体蛋白的功能研究提供一定的基础.