猪德尔塔冠状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立及应用

• 作者: 杜倩 汪伟 韩知晓 孔子荣 辛佳亮 闭璟珊 曹亮 孙文超 胡传活 郑敏
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 关键词: 猪德尔塔冠状病毒 S基因 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文|Research articles
• 页码范围: 15-21
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

为建立一种猪德尔塔病毒(PDCoV)的快速检测方法,本研究根据NCBI公布的PDCoV序列设计了1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增PDCoV的S基因,将其连接至pMD 19-T载体上,以构建正确的重组质粒作为标准品,建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的敏感性、特异性及重复性进行了验证分析.结果 显示:该检测方法在标准品浓度为6.26×101～6.26×108 copies/μL范围内呈良好线性关系,其相关性为0.999,斜率为-4.312;灵敏度良好,检测下限可达6.26×101 copies/μL;特异性良好,对PEDV和TGEV两种猪常见病原均无特异性扩增;重复性好,组内和组间变异系数均小于2.0％;利用该方法对43份临床样品进行检测,PDCoV阳性率为4.6％.结果 表明,本研究成功建立了PDCoV的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,为PDCoV快速灵敏的诊断奠定了坚实基础.