稳定表达人TMPRSS2基因BHK细胞系的建立及其对新城疫弱毒增殖效率评价

• 作者: 刘伟 李梦娇 郭佩东 孙英杰 仇旭升 谭磊 宋翠萍 廖瑛 孟春春 丁铲
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: TMPRSS2 慢病毒包装 BHK细胞 新城疫弱毒
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 594-600
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0095

摘要

为提高细胞培养系统中新城疫病毒的增殖效率,通过构建TMPRSS2过表达的BHK细胞系,探索其对新城疫弱毒增殖的影响.本研究将TMPRSS2基因克隆于噬菌体载体pHAGE中,构建重组质粒pHAGE-TMPRSS2.将重组质粒pHAGE-TMPRSS2以及辅助包装质粒psPAX2和pMD2G共转染至293T细胞并收集上清.将包装好的慢病毒感染BHK细胞,通过Blasticidin加入筛选和有限稀释法将单克隆细胞扩大培养.经RT-PCR和Western-blot鉴定,结果表明,TMPRSS2在BHK细胞中获得了稳定的高表达.接种新城疫弱毒后通过TCID50测定显示,TMPRSS2过表达BHK细胞系能支持较高水平的病毒增殖.