美洲钩虫Ascris型蛋白酶抑制剂1的特性鉴定

• 作者: 朱艳 高如秀 雷蕾 卢晓湧 崔咏诗 邓莉 邵正 彭礼飞
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 关键词: 美洲钩虫 Ascris型蛋白酶抑制剂 抗凝血
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著|Basic Research
• 页码范围: 531-534,579
• 页数: 5页
• 分类号: R383.13
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2021.05.001

摘要

目的 制备重组美洲钩虫Ascris型蛋白酶抑制剂1(rNaTIL-1),并观察其抗凝血活性及抑制丝氨酸蛋白酶作用.方法 从美洲钩虫成虫cDNA中扩增获得NaTIL-1编码基因,连接入原核表达质粒pET32a-sumo后转入到大肠埃希菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,重组产物经Ni-NTA亲和层析纯化,纯化柱上用SUMO蛋白酶切割融合伴侣后获得rNaTIL-1.用凝血时间法检测rNaTIL-1的抗凝活性,用发色底物法检测rNaTIL-1对丝氨酸蛋白酶的抑制作用.结果 成功构建了原核表达质粒pET32a-sumo/NaTIL-1,在E.coli BL21(DE3)中表达产物大部分可溶,并纯化获得了 rNaTIL-1.rNaTIL-1对血浆凝血酶原时间和活化部分凝血活酶时间均无明显影响.在100倍摩尔比的过量浓度下,rNaTIL-1对人胰凝乳蛋白酶、糜酶、纤溶酶、血浆激肽释放酶和猪胰蛋白酶、胰弹性蛋白酶均无明显抑制作用,但能抑制(91.6±0.9)％的人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)活性.rNaTIL-1抑制HNE的IC50值约为(325.50±1.05)nmol/L,Ki值约为(0.34±0.04)μmol/L.结论 NaTIL-1无抗凝血活性,但具有较强的抑制HNE活性,可能在美洲钩虫参与调控宿主炎症反应和逃避宿主免疫中发挥作用.